紫外可見(jiàn)分光光度計的用途及波長(cháng)校正分析

　　紫外可見(jiàn)分光光度計分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。紫外可見(jiàn)分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。朗伯定律是說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即朗伯-比耳定律。

　　一、用途主要歸納為以下幾點(diǎn)

　　1、鑒定物質(zhì)。用來(lái)測量待測物質(zhì)對可見(jiàn)光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，稱(chēng)為可見(jiàn)分光光度計;紫外可見(jiàn)分光光度計用來(lái)測量待測物質(zhì)對可見(jiàn)光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器?？梢詼y定核酸和蛋白的濃度，也可以測定細菌細胞密度。

　　2、待測物質(zhì)是標準物及標準圖譜對照進(jìn)行分析。

　　3、比較z大吸收波長(cháng)吸收系數的一致性。

　　4、物質(zhì)的純度檢驗。

　　5、推測化合物的分子結構及構成。

　　6、是判定絡(luò )合物的組成及穩定常數的測定。

　　二、紫外可見(jiàn)分光光度計的波長(cháng)怎樣校正。

　　1．調整

　?。?） 在接通電源前，應對儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線(xiàn)接線(xiàn)應牢固，接地線(xiàn)通地要良好，各個(gè)調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再接通電源。

　?。?） 將靈敏度旋鈕調至“1”檔（放大倍率z?。?。調波長(cháng)調節器至所需波長(cháng)。

　?。?） 開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)，指示燈亮，選擇開(kāi)關(guān)置于“T”，調節透光率[100%T]旋鈕使數字顯示[100.0]左右，預熱20min .

　　根據溶液濃度大小，選擇液層厚度合適的吸收池。

　　2．校正

　?。ǎ。┐蜷_(kāi)吸收池暗室蓋（光門(mén)自動(dòng)關(guān)閉），調節[0% T]旋鈕，使數字顯示為“00.0”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調節透光率[100% T] 旋鈕，使數學(xué)顯示為“100.0”。

　?。?）如果顯示不到“100”，則可適當增加電流放大器靈敏度檔數，但應盡可能使用低檔數，這樣儀器將有更高的穩定性。當改變靈敏度 后必須重新校正“0”和“100”。

　?。?）按（1）連續幾次調整“00.0”和“100.0”后，如將選擇開(kāi)關(guān)置于“A”，調節吸光度調零旋鈕，使數字顯示為“.000”，即可進(jìn)行下面吸光度A的測量；如將選擇開(kāi)關(guān)置于“C”，將標準溶液推入光路，調節濃度旋鈕，使得數字顯示值為已知標準溶液濃度數值，即可進(jìn)行下面濃度c的測量。

　　3．測定

　?。?)吸光度Ａ的測量。將要測Ａ的試樣溶液推入光路，顯示值即為待測樣品的吸光度值Ａ。

　?。?)濃度c的測量。將要測c試樣溶液推入光路，即可讀出待測樣品的濃度值c。

　　4．結束

　　測量完畢，關(guān)閉電源，將各調節旋鈕恢復至初始位置。取出吸收池洗凈，晾干，存于專(zhuān)用盒內。

　　5.注意事項：

　?。?)使用前，使用者應該首先了解本儀器的結構和原理，以及各個(gè)旋鈕之功能。

　?。?)儀器接地要良好，否則顯示數字不穩定。

　?。?)如果大幅度改變測試波長(cháng)時(shí)，在調整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量變化急劇，光電管受光后響應緩慢，需一段光響應平衡時(shí)間），當穩定后，重新調整“00.0”和“100”即可工作。

　?。?)儀器左側下角有一只干燥劑筒，應保持其干燥，發(fā)現干燥劑變色應立即更新或烘干后再用。

　?。?)當儀器停止工作時(shí)，關(guān)掉電源，電源開(kāi)關(guān)需同時(shí)切斷，并罩好儀器。